A NAD+ és metabolitjainak számszerűsítése az egér ülőidegeiben
Bevezetés
A nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD+) és metabolitjainak kulcsfontosságú részei az öregedésben és a neurodegenerációban széles körben elismertek. Az öregedést és a neurodegeneratív betegségeket célzó biokémiai kutatások és beavatkozások ösztönzése érdekében nagy jelentőséggel bír a NAD+ és metabolitszintjének pontos számszerűsítése a NAD+ mentési útvonalon. Itt egy robusztus és pontos LC-MS/MS módszert alkalmazunk a NAD+ és metabolitjainak szintjének számszerűsítésére normál és sérült egér ülőidegben.
A NAD+ és metabolitjainak számszerűsítésére szolgáló meglévő módszerek korlátai
A NAD+ és metabolitjainak számszerűsítésére szolgáló hagyományos módszerek, mint például a HPLC-UV, NMR, kapilláris zóna elektroforézis vagy kolorimetriás enzimatikus vizsgálatok, különféle kihívásokkal szembesülnek az érzékenység, a szelektivitás és a közvetett mérés terén. Ami a sejtes vagy szöveti NAD+ és metabolitjainak mérésére vonatkozó meglévő LC-MS/MS vizsgálatokat illeti, még mindig sok nehézséget kell leküzdeni, például a hosszabb futási időt, a rossz kromatográfiás retenciós viselkedést és a nem kielégítő csúcsalakokat. Ezenkívül a NAD+ mentési útvonalon csak egy-három anyag fedhető le ezekkel a módszerekkel.
Az LC-MS/MS módszer módosításai
A meglévő LC-MS/MS vizsgálatok alapján elvégezzük a kromatográfiás körülmények, a helyettesítő mátrix és az MS/MS feltételek módosítását. Pontosabban, 5 μM metilén-foszfonsavat alkalmaznak mozgó fázisú adalékanyagként, amely kifejezetten elősegíti a jel intenzitását és a csúcs alakját. Tekintettel a soha minták viszonylag tiszta és egyszerű jellegére és kis méretére, az ultratiszta vizet helyettesítő mátrixként tesztelik. A hidrofil kölcsönhatású folyadékkromatográfiás oszlop és a hiperkarbór oszlop helyett a Waters Atlantis Premier BEH C18 AX oszlopot használják, amelynek egyedülálló MaxPeak HPS nagy teljesítményű felületi technológiája (az oszlop belső falának passziválása, fémfelület kiküszöbölése) lehetővé teszi az összes analit nagy reprodukálhatóságát, csúcsszimmetriáját és alapvonali elválasztását.Ezenkívül az MS feltételeket úgy optimalizálták, hogy minimalizálják a NAD+ interferenciajelet a ciklikus adenozin-difoszfát-ribóz (cADPR) csatornában, miközben fenntartják a cADPR és a nikotinamid-mononukleotid (NMN) válaszát, 4000 V-os ionpermetfeszültséggel, 450 °C-kal a turbófűtés hőmérsékletével, 50 psi-vel az 1-es gáznál, 50 psi-vel a 2-es gáznál, 30 psi-vel függönygáznál és 12 psi-vel ütközési gáznál.
Idegminták reprezentatív kromatogramja (normál vagy sérült)
Mind az öt analit eléri a kiindulási elválasztást, ahol a cADPR érzékeny biomarker a neurodegenerációs modellben. Ebben az ülőideg axotómiája axonális degenerációt indukál, ami a sérült idegekben csökkent NAD+ szinthez és emelkedett NMN-szinthez vezet, ami az NMN/NAD+ arány körülbelül 2-szeres növekedését eredményezi. Ezzel párhuzamosan a nikotinamid (NAM) és az adenozin-difoszfát-ribóz (ADPR) szintje körülbelül 2-szeresére, míg a cADPR szintje több mint 8-szorosára emelkedik. Ezek az eredmények összhangban vannak a korábban közölt kutatások eredményeivel, amelyek igazolják ennek a módosított LS-MS/MS módszernek a pontosságát a NAD+ és metabolitjainak számszerűsítésében.
Következtetés
Ez a módosított LC-MS/MS módszer lehetővé teszi a NAD+, NMN, NAM, ADPR és cADPR hatékony kiindulási elválasztását rövid, 5 perces futási időn belül, ami hozzájárul a különböző neurológiai rendellenességek korai diagnosztizálásához, valamint az öregedési és neurodegeneratív betegségek gyógyszerfejlesztéséhez.
Utalás
MA Y, TENG L, DU Z. LC-MS/MS módszer kidolgozása és validálása a NAD+ és a rokon metabolitok számszerűsítésére egerek ülőidegeiben, valamint alkalmazása idegsérüléses állatmodellben. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821
BONTAC NAD
BONTAC 2012 óta foglalkozik koenzim és természetes termékek nyersanyagainak kutatás-fejlesztésével, gyártásával és értékesítésével, saját tulajdonú gyárakkal, több mint 170 globális szabadalommal, valamint erős kutatás-fejlesztési csapattal. A BONTAC gazdag kutatás-fejlesztési tapasztalattal és fejlett technológiával rendelkezik a bioszintézisben A NAD és elődjei (pl. NMN és NR). Különböző típusú NAD-okat kell kiválasztani, beleértve a NAD ER fokozatot (endoxin eltávolítás), a NAD I. fokozatot (IVD/étrend-kiegészítő/kozmetikai nyerspor), a NAD II. fokozatot (API/intermedierek) és a NAD IV. fokozatot (ha van ilyen, magasabb oldhatósági követelmény), amelyek liofilizált por vagy kristályos por formájában biztosíthatók. A BONTAC NAD tisztasága elérheti a 98% -ot.
Lemondás
Ez a cikk a tudományos folyóiratban megjelent hivatkozáson alapul. A vonatkozó információk kizárólag megosztási és tanulási célokat szolgálnak, és nem jelentenek orvosi tanácsadási célt. Ha bármilyen jogsértés történik, kérjük, vegye fel a kapcsolatot a szerzővel a törlés érdekében. Az ebben a cikkben kifejtett nézetek nem képviselik a BONTAC álláspontját. A BONTAC semmilyen körülmények között nem tehető felelőssé semmilyen követelésért, kárért, veszteségért, kiadásért vagy költségért, amely közvetlenül vagy közvetve a weboldalon található információkra és anyagokra való támaszkodásból ered.