Az ultraérzékeny ELISA rendkívüli érdemei a Thio-NAD ciklussal a dengue NS1 fehérje meghatározásában

1. Bevezetés

A dengue-láz egy akut fertőző betegség, amelyet a Dengue-vírusfertőzött Aedes faj (Ae. aegypti vagy Ae. albopictus) szúnyogcsípésével, fő tünetekkel, mint például magas láz, szédülés, fejfájás, bőrkiütés és Erősfájdalmak (szem-, izom-, ízületi vagy csontfájdalom) stb. Ez a betegség széles körben elterjedt a trópusi és szubtrópusi éghajlaton. Becslések szerint évente 100-400 millió ember fertőződik meg, akiknek több mint 80%-a általában enyhe és tünetmentes. Mindazonáltal a súlyos dengue-láz növelheti a halálozás kockázatát, ha nem kezelik megfelelően. Így ennek a betegségnek a korai diagnosztizálása jelentős az időben történő kezelés szempontjából.

Figyelemre méltó, hogy a nem szerkezeti fehérje 1 (NS1), egy erősen konzervált glikoprotein, főként a fertőzés során választódik ki. Dengue vírus, amelyet intenzíven a fő patogenezis tényezőjének tekintenek Dengue-láz. Ezért az NSI-t általában biomarkerként használják a betegség korai felismerésére.

Ebben a tanulmányban egy szendvicsenzimhez kötött immunszorbens vizsgálat(ELISA)a Nikotinamid-adenin-dinukleotid (THIO-NAD/S-NAD) kerékpáros módszer (a továbbiakban: ultraérzékeny ELISA) az NSI kimutatására szolgál, majd a NAAT-tal való összehasonlítás a kimutatási pontosság megerősítésére.

2. A hagyományos észlelési módszerek előnyei és hátrányai Dengue-láz 

Jelenleg tÍme négy fő észlelési módszer részére Dengue-láz.


A vírus izolálása és azonosítása magas specificitású, de időigényes, legalább 5 napot vesz igénybe. Az antigén gyorsteszt a leggyorsabb és legköltséghatékonyabb a többi módszer közül, de az érzékenység és a specificitás viszonylag alacsony. Az IgM és IgG alapú szerológiai tesztet a fertőzés napjainak száma korlátozza, mivel a A vizsgálatot el kell halasztani, amíg az ellenanyagok szintje kimutatható szintre nem emelkedik.

A klinikán a NAAT-ot gyakran alkalmazzák a Dengue-láznagy érzékenységének és specifikusságának szennyeződése. Ez a módszer azonban drága, fáradságos és hajlamos a hamis pozitivitásra, amelyet a képzett személyzetnek kell elvégeznie. E módszerek hátrányainak leküzdésére egy új észlelési módszer ultraérzékeny ELISA alkalmazása ebben a tanulmányban.

3. Ultraérzékeny ELISA munkafolyamata tio-NAD ciklussal

Egy pár antitest vana szendvics ELISA-ban lévő NS1 fehérje és az alkalikus foszfatáz befogására használják vana másodlagos antitestre van jelölve. Az antitesteken kívül egy androszteron-származék, 3α-hidroxiszteroid-dehidrogenáz, tio-NAD és NADH vana tio-NAD enzimciklus-rendszer felépítéséhez használják. A tio-NAD ciklusreakció során a tio-NADH folyamatosan háromszög alakú számszerűen halmozódott fel, és 405 nm-es abszorbancián közvetlenül mérhető volt.

4. Az ultraérzékeny ELISA és a NAAT összehasonlítása a Dengue NS1 fehérje kimutatásában

A NAAT-ban 60 minta dengue-pozitív, 25 pedig dengue-negatív. A dengue-pozitív minták NAAT ciklusos küszöbértéke (CT) 12,42 és 31,41 között mozgott. Az ultraérzékeny ELISA-ban 59 minta ennek megfelelően pozitívan értékeli a NAAT eredményeket, míg 25 minta teljesen negatívan reagál a NAAT eredményekre.

A NAAT-hoz képest az ultraérzékeny ELISA szenzitivitása és specificitása 98,3%, illetve 100% (2. táblázat). A 60 NAAT-megerősített dengue-pozitív betegmintából csak 1 minta negatív az ultraérzékeny ELISA-ban. A NAAT adatai azt mutatták, hogy a minta 4-es típusú DENV fertőzéses eset, 21,59-es CT-értékkel. Az ultraérzékeny ELISA eredményei szinte tökéletesen megegyeznek a NAAT eredményeivel, 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).

5. Következtetés

Az ultraérzékeny ELISA módszer könnyen végrehajtható, és nem igényel professzionális gyakornokokat. A kimutatás egy kis minta beérkezése után azonnal megkezdhető. Különösen alkalmas a dengue-láz korai felismerésére az alacsony jövedelmű országokban.

Utalás

Chen, Po-Kai et al. "Fejlett kimutatási módszer a dengue NS1 fehérjéhez ultraérzékeny ELISA és Thio-NAD kerékpározás segítségével." Vírusok, vol. 15,9, 1894. 2023. szeptember 8., doi:10.3390/v15091894

A termék előnyei és jellemzői BONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC is oa kevés vállalkozás közül az egyik, Kínaamely képes Thio-NAD-ot termelnival "Bonzyme"Teljes enzimatikus módszer(környezetbarát;nincs káros oldószermaradvány) és egyedülálló "Bonpure" hétfokozatú tisztítási technológia. A BONTAC integrálja a kutatás-fejlesztést, a gyártást és az értékesítést saját tulajdonú gyárak és számos nemzetközi tanúsítvány a magas minőség és a stabil termékellátás biztosítása érdekében.

Lemondás

A BONTAC nem vállal felelősséget semmilyen követelésért, amely közvetlenül vagy közvetve a weboldalon található információkra és anyagokra való támaszkodásból ered.