Az ultraérzékeny ELISA és a tio-NAD ciklus rendkívüli előnyei a Dengue NS1 fehérje meghatározásában
1. Bevezetés
A dengue-láz egy akut fertőző betegség, amelyet aDenguevírus egy fertőzött Aedes faj (Ae. aegypti vagy Ae. albopictus) szúnyog harapásán keresztül,a fő tünetei, mint a magas láz, szédülés, fejfájás, kiütés éssúlyos fájdalmak (szem-, izom-, ízületi vagy csontfájdalom), stb. Ez a betegség széles körben elterjedt trópusi és szubtrópusi éghajlaton. Becslések szerint évente 100–400 millió ember fertőződik meg, ahol általában több mint 80% enyhe és tünetmentes. Ennek ellenére a súlyos Dengue-láz növelheti a halálkockázatot, ha nem megfelelően kezelik. Ezért a betegség korai diagnosztizálása fontos az időben történő kezelés szempontjából.Érdemes megemlíteni, hogy a nem szerkezeti fehérje 1 (NS1), egy erősen konzerválódó glikoprotein, főként a fertőzés során válogatódik kiDenguevírus, amelyet intenzíven a fő patogenezis tényezőnek tartanakDengue-láz. Ezért az NSI-t általában biomarkerként használják a betegség korai kimutatásához.
Ebben a tanulmányban egy szendvics-enzimhez kötött immunosorbent vizsgálat (ELISA) kombinálva aThio nikotinamid adenin dinukleotid (tio-NAD/S-NAD)Kerékpározási módszer (ezután ultraérzékeny ELISA néven ismert) az NSI detektálására használják, majd összehasonlítják a NAAT-val, hogy megerősítsék annak pontosságát.
2. A hagyományos detektálási módszerek előnyei és hátrányaiDengue-láz
Jelenleg, tÍme négy fő detektálási módszerfor Dengue-láz.
Vírusos izoláció és az azonosítás nagy specifikusságú, de időigényes, legalább 5 napot vesz igénybe. A Gyors antigén A teszt a leggyorsabb és legköltséghatékonyabb a többi módszer között, de az érzékenység és a specifikusság viszonylag alacsony. Az IgM és IgG alapú szerológiai teszt a következőképpen korlátozott a fertőzés napjai száma, mintaA tesztet el kell halasztani az antitestek szintjéig észlelhető szintre emelkedik.
Klinikán gyakran alkalmazzák a NAAT-ot a meghatározásraDengue-láz A nagy érzékenysége és specifikussága miatt. Ez a módszer azonban drága, fárasztó, és hajlamos a hamis pozitivitásra, amit a képzett személyzetnek kell alkalmaznia.A módszerek hátrányainak leküzdésére egy új detektálási módszerUltraérzékeny ELISA ebben a tanulmányban alkalmazták.
3. Az ultraérzékeny ELISA munkafolyamata tio-NAD ciklussal
Egy pár antitestaz az ELISA szendvicsben található NS1 fehérje és az alkalin fosfatáz befogására használjákaz a másodlagos antitesten van jelölve. Az antitesteken kívül egy androsteron származék, 3α-hidroxiszeroid dehidrogenáz, tio-NAD és NADHvannak amelyet a thio-NAD enzim ciklikus rendszer felépítésére használnak. A thio-NAD ciklikus reakció során a thio-NADH folyamatosan háromszög alakú számban halmozódott, és közvetlenül mérhető volt 405 nm elnyelési értéken.
4. Az ultraérzékeny ELISA és a NAAT összehasonlítása a Dengue NS1 fehérje kimutatásában
A NAAT-ban 60 példány dengue-pozitív, 25 pedig dengue-negatív. Ezeknek a dengue-pozitív mintáknak a NAAT ciklusküszöbértéke (CT) 12,42 és 31,41 között mozgott.Az ultraérzékeny ELISA esetében 59 minta megfelelően pozitív a NAAT eredményekre, míg 25 minta teljesen negatív a NAAT eredményekhez.A NAAT-hoz képest az ultraszenzitás ELISA érzékenysége és specifikussága 98,3% és 100% (2. táblázat). A 60 NAAT-által megerősített dengue-pozitív betegmintából csak 1 minta negatív az ultraérzékeny ELISA-ban. A NAAT adatai szerint a minta 4-es típusú DENV fertőzés, CT értéke 21,59. Az ultraérzékeny ELISA eredményei szinte tökéletesen egyeznek a NAAT eredményeivel, a kappa érték 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).
5. Összegzés
UAz ELISA módszer könnyen elvégezhető, és nem igényel professzionális gyakornokot. TA detektálást azonnal megkezdhetjük egy kis minta felvétele után. Különösen alkalmas a korai kimutatásraDengueBetegség alacsony jövedelmű országok.Hivatkozás
Chen, Po-Kai és mtsai "Fejlett detektálási módszer Dengue NS1 fehérjére ultraérzékeny ELISA használatával Thio-NAD ciklussal." Vírusok, 15,9. kötet, 1894. 2023. szeptember 8., doi:10.3390/v15091894A termék előnyei és jellemzőiBONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC az oA kevés vállalkozás egyikeKína amely képes Thio-NAD-ot előállítani, és"Bonzyme" Teljes enzimatikus módszer (környezetbarát; Nincsenek káros oldószermaradványok) és egyedi "Bonpure" hétlépéses tisztító technológiát. A BONTAC az R&K-t, a gyártást és az értékesítést integrálja a önálló gyárak, valamint számos nemzetközi tanúsítvány a termékek magas minőségének és stabil ellátásának biztosítása érdekében.
