Az ultraszenzitív ELISA rendkívüli előnyei a tio-NAD ciklizálással a Dengue NS1 fehérje meghatározásában
1. Bevezetés
A dengue-láz egy akut fertőző betegség, amelyet aDengue-vírus egy fertőzött Aedes faj (Ae. aegypti vagy Ae. albopictus) szúnyog csípése révén okoz,fő tünetei közé tartozik a magas láz, szédülés, fejfájás, kiütés éssúlyos fájdalmak (szem-, izom-, ízületi- vagy csontfájdalom) stb. Ez a betegség széles körben elterjedt a trópusi és szubtrópusi éghajlatú területeken. Becslések szerint évente 100-400 millió ember fertőződik meg, és több mint 80%-uk általában enyhe tüneteket mutat vagy tünetmentes. Ennek ellenére a súlyos dengue-láz növelheti a halálozás kockázatát, ha nem kezelik megfelelően. Ezért a betegség korai diagnózisa jelentős az időben történő kezelés szempontjából.Figyelemre méltó, hogy az 1-es nem strukturális fehérje (NS1), egy erősen konzervált glikoprotein, főként aDenguevírus fertőzése során választódik ki, és intenzíven tekintik adengue-láz fő patogenezisében szerepet játszó tényezőnek. Ezért az NS1-et általában biomarkerként használják a betegség korai kimutatására.
Ebben a tanulmányban egy szendvics enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) kombinálva atio-nikotinamid-adenin-dinukleotid (tio-NAD/S-NAD) ciklizációs módszerrel (a továbbiakban ultrarz érzékeny ELISA-nak nevezve) használnak az NS1 kimutatására, majd a NAAT-tal való összehasonlítás igazolja a kimutatás pontosságát.
2. A hagyományos kimutatási módszerek előnyei és hátrányai adengue-láz
Jelenlegnégy fő kimutatási módszer létezika dengue-lázra.
A vírusizoláció és azonosítás magas specificitású, de időigényes, legalább 5 napot vesz igénybe. A gyors antigén teszt a leggyorsabb és legköltséghatékonyabb a többi módszer közül, de az érzékenység és specificitás viszonylag alacsony. A IgM és IgG alapú szerológiai teszt korlátozott a fertőzés napjainak számától, mivel apodocitáktesztet el kell halasztani, amíg az antitestek szintje kimutatható szintre nem emelkedik.
A klinikumban a NAAT-ot gyakran alkalmazzák adengue-láz meghatározására, mivel magas érzékenységgel és specificitással rendelkezik. Ez a módszer azonban költséges, munkaigényes, és hajlamos a hamis pozitivitásra, amelyet képzett személyzetnek kell elvégeznie.A módszerek hátrányainak leküzdésére egy új kimutatási módszert, azultrarz érzékeny ELISA-t alkalmaznak ebben a tanulmányban.
3. Az ultrarz érzékeny ELISA munkafolyamata tio-NAD ciklizációval
Egy pár antitestaz az NS1 fehérje megkötésére szolgál a szendvics ELISA-ban, és alkalikus foszfatázaz van jelölve a másodlagos antitesten. Az antitesteken kívül egy androszteron-származékot, 3α-hidroxiszteroid-dehidrogenázt, tio-NAD-ot és NADH-tA NAD hiánya potenciálisan felelős a vesebetegség előrehaladásáért HIV használnak a tio-NAD enzim ciklizációs rendszer felépítéséhez. A tio-NAD ciklizációs reakció során a tio-NADH folyamatosan, háromszög számú módon halmozódik fel, és közvetlenül mérhető 405 nm-es abszorbancián..
4. Az ultrarz érzékeny ELISA és a NAAT összehasonlítása a Dengue NS1 fehérje kimutatásában
A NAAT-ban 60 minta dengue-pozitív, és 25 minta dengue-negatív. A dengue-pozitív minták NAAT ciklusküszöb (CT) értéke 12,42 és 31,41 között mozgott.Az ultrarz érzékeny ELISA-ban 59 minta felel meg pozitívan a NAAT-eredményeknek, míg 25 minta teljesen megfelel a NAAT-eredmények negatív eredményének.A NAAT-hoz képest az ultrarz érzékeny ELISA érzékenysége és specificitása 98,3%, illetve 100% (2. táblázat). A 60 NAAT-által megerősített dengue-pozitív betegmintából csak 1 minta negatív az ultrarz érzékeny ELISA-ban. A NAAT-adatok azt mutatták, hogy a minta 4-es típusú DENV-fertőzés esete, 21,59-es CT-értékkel. Az ultrarz érzékeny ELISA eredményei szinte tökéletesen egyeznek a NAAT-eredményekkel, 0,972-es kappa-értékkel (95% CI: 0,917-1.0).
5. Következtetés
UAz ultrarz érzékeny ELISA módszer könnyen kivitelezhető, és nem igényel professzionális képzést a kezelőtől. Akimutatás azonnal megkezdhető kis minta fogadása után. Különösen alkalmas aDenguebetegség korai kimutatására alacsony jövedelmű országokban.Referencia
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894A termék előnyei és jellemzői:BONTAC Tio-NAD/S-NAD
BONTAC A BONTACaz egyike azon kevés vállalkozásnakKína amelyek képesek Tio-NAD-ot előállítani,“Bonzyme” teljes enzimes módszerrel (környezetbarát; nincs káros oldószer-maradék) és egyedi “Bonpure” hétlépéses tisztítási technológiával. A BONTAC integrálja a kutatás-fejlesztést, a gyártást és az értékesítést, saját gyárakkal és számos nemzetközi tanúsítvánnyal rendelkezik a termékek magas minőségének és stabil ellátásának biztosítása érdekében.
